| 產(chǎn)品編號(hào) | MFM001 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 英文名稱 | Mouse TNF-α/IFN-γ /IL-6/IL-10/IL-12/MCP-1 Cytokine Kit (Flow Cytometry Multiplex Bead Assay) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 中文名稱 | 小鼠六項(xiàng)細(xì)胞因子檢測(cè)試劑盒（流式熒光發(fā)光法） | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 性 狀 | Lyophilized or Liquid | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 保存條件 | 2～8℃，避光保存，有效期18個(gè)月。開(kāi)瓶后避光2～8℃保存，可保存不超過(guò)30天。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 注意事項(xiàng) | This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications. | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 產(chǎn)品介紹 |
產(chǎn)品介紹 本試劑盒采用CBA多因子流式檢測(cè)技術(shù)，微球熒光編碼不同，不同微球群上包被mouse TNF-α/IFN-γ /IL-6/IL-10/IL-12/MCP-1特異性抗體，與待測(cè)樣本孵育，可與樣本中mouse TNF-α/IFN-γ /IL-6/IL-10/IL-12/MCP-1特異性結(jié)合，之后加入生物素標(biāo)記的檢測(cè)抗體，形成抗體包被微球-細(xì)胞因子-檢測(cè)抗體的免疫復(fù)合物；最后加入藻紅蛋白標(biāo)記的鏈霉親和素，與生物素結(jié)合，通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)，獲得待測(cè)物的熒光強(qiáng)度，熒光強(qiáng)度與樣本中mouse TNF-α/IFN-γ /IL-6/IL-10/IL-12/MCP-1的含量成正比，最后結(jié)合這六種細(xì)胞因子標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)同一份樣本中mouse TNF-α/IFN-γ /IL-6/IL-10/IL-12/MCP-1的定量檢測(cè)。從而輔助判斷機(jī)體的免疫功能狀態(tài)。 預(yù)期用途 檢測(cè)小鼠生物標(biāo)本中TNF-α/IFN-γ/IL-6/IL-10/IL-12/MCP-1的表達(dá)水平。 試劑盒組成
注：試劑盒中不包括，但試驗(yàn)需要的材料：流式管，15 mL 離心管，1. 5 mL EP 管，錫箔紙，磁力板。 適用機(jī)型： 本品適用于BD公司的BD FACSCanto II、Beckman Navios 6/2和艾森公司的ACEA NovoCyte 等有PE、APC通道的流式細(xì)胞儀。 樣本要求： 血清：建議4-6小時(shí)內(nèi)檢測(cè)，如無(wú)法及時(shí)檢測(cè)請(qǐng)-20℃凍存，忌反復(fù)凍融。
檢驗(yàn)方法 1. 洗液（1×)的準(zhǔn)備 顛倒混合標(biāo)有20×洗液的瓶子。在475 mL蒸餾水中加入20×洗液25 mL，并輕輕混合以免起泡沫。儲(chǔ)存于2～8℃待用。 2. 標(biāo)準(zhǔn)品制備（準(zhǔn)備7個(gè)1.5 mL EP管分別編號(hào)2.3.4.5.6.7.8 ） 2.1取出標(biāo)準(zhǔn)品凍干粉，每個(gè)因子用20 μL標(biāo)準(zhǔn)品/樣品稀釋液溶解，充分混勻，室溫放置10分鐘，將溶解后的六個(gè)因子轉(zhuǎn)移至1號(hào)管，并補(bǔ)80 μl標(biāo)準(zhǔn)品/樣品稀釋液，作為標(biāo)準(zhǔn)品最高濃度5000 pg/mL。 2.2 其他7個(gè)（2～8 號(hào)）EP管中分別加入150 μL標(biāo)準(zhǔn)品/樣品稀釋液，準(zhǔn)備梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。 2.3 在1號(hào)管中轉(zhuǎn)移50 μL標(biāo)準(zhǔn)品到2號(hào)管充分混勻，再在2號(hào)管轉(zhuǎn)移50 μL到3號(hào)管充分混勻。以同樣方式依次連續(xù)稀釋到7號(hào)管。
3. 捕獲微球混合液處理 確定實(shí)驗(yàn)孔數(shù)（包括標(biāo)準(zhǔn)品和樣本），計(jì)算所需捕獲微球混合液的用量。例如：待測(cè)樣本88個(gè)，標(biāo)準(zhǔn)品8個(gè), 共計(jì)96孔。每個(gè)孔需要捕獲微球混合液50 μL。我們可以按100孔的量進(jìn)行微球混合，需取5000 μL捕獲微球混合液。（注意：需將捕獲微球渦旋20 s，充分混勻后再?。?/span> 4. 樣本處理 建議對(duì)于血清或血漿樣本需使用標(biāo)準(zhǔn)品/樣品稀釋液進(jìn)行2倍稀釋。 表1
5. 操作步驟 *實(shí)驗(yàn)前將所有試劑取出平衡至室溫； *實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，包括清洗步驟，將板子始終水平放置，以免珠子丟失； *孵育過(guò)程中，板子應(yīng)注意避光。 5.1 從梯度稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品1-8號(hào)管中分別取出50 μL移入對(duì)應(yīng)的96孔板孔中。 5.2 其余樣本孔每孔加入稀釋好的血清或血漿樣本50 μL。 5.3 渦旋微球30 s，每孔加入50 μL微球，現(xiàn)每孔體積應(yīng)為100 μL/孔。（加微球過(guò)程中應(yīng)隨時(shí)渦旋微球管，避免微球沉降，建議每加8個(gè)孔，渦旋混勻一次微球）。 5.4 將96孔板放到搖床上450 rpm/min搖2min后，放入37℃溫箱，避光孵育30min。 5.5 將96孔板卡在磁力板上5min，去除上清。 5.6 將96孔板從磁力板上取下，每孔加入200μL洗液。 5.7 重復(fù)步驟 5.5。 5.8 將96孔板從磁力板上取下，每孔加入100μL檢測(cè)抗體。 5.9 將96孔板放到搖床上450 rpm/min搖2min后，放入37℃溫箱，避光孵育30min。 5.10 重復(fù)步驟5.5-5.7。 5.11 將96孔板從磁力板上取下，每孔加入100μL藻紅蛋白標(biāo)記的鏈霉親和素。 5.12 將96孔板放到搖床上450 rpm/min搖2min后，放入37℃溫箱，避光孵育15min。 5.13 重復(fù)步驟5.5-5.7。 5.14 每孔加入200μL洗液重懸樣本，上流式細(xì)胞儀檢測(cè)。 6. 流式細(xì)胞儀檢測(cè) 6.1 微球群分布 ： 表2
注 ：微球內(nèi)部用不同強(qiáng)度的熒光染料染色。 6.2 模板建立： 建立X軸為FSC、Y 軸為SSC的線性散點(diǎn)圖模板，設(shè)定混合微球位置，如說(shuō)明書圖1； 建議兩個(gè)PE（X軸）和APC的對(duì)數(shù)散點(diǎn)圖模板，分別顯示R1門或R2門內(nèi)微球，使得所有的微球群能夠清楚和明顯的分布于散點(diǎn)圖上，顯示各因子PE熒光強(qiáng)度。如說(shuō)明書圖2，說(shuō)明書圖3。調(diào)節(jié)PE PMT電壓，使所有微球群左側(cè)不壓線，右側(cè)位于PE軸檢測(cè)范圍內(nèi)（說(shuō)明書圖2,3）。 6.3 樣品的檢測(cè)結(jié)果分析 各標(biāo)準(zhǔn)品及樣本依次上機(jī)檢測(cè)，對(duì)于每種微球群，應(yīng)最少獲取100個(gè)微球。利用標(biāo)準(zhǔn)品梯度作標(biāo)曲，計(jì)算樣本檢測(cè)結(jié)果。 檢測(cè)結(jié)果的解釋 1. 待檢測(cè)樣本細(xì)胞因子的測(cè)定在表3檢測(cè)范圍內(nèi)，測(cè)定結(jié)果有效，可直接報(bào)告測(cè)定結(jié)果；若檢測(cè)結(jié)果超出檢測(cè)范圍,應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)品/樣品/微球稀釋液將樣本稀釋適當(dāng)?shù)谋稊?shù)重新檢測(cè)；若待測(cè)樣本的檢測(cè)結(jié)果低于檢測(cè)下限或未檢測(cè)到，則直接報(bào)告為≤最低檢測(cè)值。 表3
2. 建議：負(fù)責(zé)數(shù)據(jù)揭示和出具報(bào)告的實(shí)驗(yàn)人員需經(jīng)過(guò)正規(guī)的技術(shù)培訓(xùn)。 檢驗(yàn)方法的局限性 不合理的樣本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)、儲(chǔ)存、處理以及儀器的設(shè)置不當(dāng)均有可能導(dǎo)致錯(cuò)誤的檢測(cè)結(jié)果。 產(chǎn)品性能指標(biāo) 1. 外觀和性狀 試劑盒各組份應(yīng)齊全、完整，液體無(wú)滲漏；外包裝應(yīng)完整、無(wú)破損，標(biāo)簽應(yīng)清晰、易識(shí)別。 2. 裝量 應(yīng)符合要求，不低于標(biāo)示值。 3. 準(zhǔn)確度 使用本試劑盒檢測(cè)已知濃度的樣本，其檢測(cè)結(jié)果相對(duì)偏差在±15%以內(nèi)。 4. 重復(fù)性 本試劑盒檢測(cè)TNF-α/IFN-γ/IL-6/IL-10/IL-12/MCP-1變異系數(shù)（CV）應(yīng)≤15%。 注意事項(xiàng) 1. 實(shí)驗(yàn)樣本、質(zhì)控/標(biāo)準(zhǔn)品、實(shí)驗(yàn)廢棄物等材料應(yīng)當(dāng)作為潛在傳染物進(jìn)行處理，并且采用符合法規(guī)的預(yù)防措施對(duì)其處理。 2. 流式細(xì)胞儀未經(jīng)正確校準(zhǔn)、熒光滲漏未進(jìn)行合理補(bǔ)償以及檢測(cè)區(qū)域（設(shè)門）未精確定位，則可能產(chǎn)生錯(cuò)誤的檢測(cè)結(jié)果。請(qǐng)參考該儀器操作規(guī)程進(jìn)行校準(zhǔn)，確保儀器在使用前處于最佳檢測(cè)狀態(tài)。 3. 本品含熒光素，切勿直接接觸皮膚或沾染食物，操作時(shí)務(wù)必戴手套操作。 5. 標(biāo)準(zhǔn)品在配成溶液后，請(qǐng)?jiān)?0小時(shí)內(nèi)使用。 6. 在使用之前，捕獲微球混合液必須充分的振動(dòng)混合。 7. 為確保熒光檢測(cè)質(zhì)量，凡涉及檢測(cè)抗體的相關(guān)步驟都需避光操作。 不同批號(hào)的試劑請(qǐng)勿混用，并請(qǐng)?jiān)谟行诜秶鷥?nèi)使用。
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